重组蛋白包涵体
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- 发布时间：2022-03-03 12:33
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当重组蛋白在宿主系统中高水平表达时，很容易形成不溶的、无活性的蛋白质聚集体称为包涵体。包涵体须在适当的条件下变性溶解、复性形成天然构象，才能获得生物活性蛋白，恢复其生物活性。
重组蛋白包涵体
当重组蛋白在宿主系统中高水平表达时，很容易形成不溶的、无活性的蛋白质聚集体称为包涵体。包涵体须在适当的条件下变性溶解、复性形成天然构象，才能获得生物活性蛋白，恢复其生物活性。
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什么是重组蛋白包涵体?
当重组蛋白在宿主系统中高水平表达时，很容易形成不溶的、无活性的蛋白质聚集体称为包涵体。包涵体须在适当的条件下变性溶解、复性形成天然构象，才能获得生物活性蛋白，恢复其生物活性。
目前，大肠杆菌表达系统是生产重组蛋白常用的表达系统，其重组蛋白的表达水平可达细胞蛋白的50%。其他成分主要包括一些杂蛋白、质粒DNA、脂质、肽聚糖、脂多糖等成分。而重组蛋白的高表达往往会形成高密度的不溶性蛋白颗粒，即没有生物活性的包涵体，蛋白质只有复性后才能恢复生物活性。
重组蛋白包涵体有什么特点?
包涵体一般含有50%以上的重组蛋白，其余为核糖体元件、RNA聚合酶、外膜蛋白ompC、ompF和ompA、环状或切口质粒DNA、脂质和脂多糖等。不溶于水，仅溶于变性剂。
重组蛋白包涵体的形成原因是什么?
(1)宿主的代谢水平会受到重组蛋白高表达的影响，蛋白质没有足够的时间折叠;
(2)二硫键的形成受宿主细胞内环境的影响，或者由于二硫键不能正确配对，蛋白质之间非特异性结合过多，蛋白质不能达到足够的溶解性;
(3)重组蛋白的氨基酸组成不同。一般来说，含硫氨基酸和脯氨酸的含量与包涵体的形成呈正相关;
(4)环境因素，如重组蛋白的环境温度、培养基的成分、pH、离子强度等。可以影响包涵体的形成。有研究发现，温度与包涵体的形成呈正相关，当培养基缺乏营养物质时，包涵体容易形成;
(5)真核生物中重组蛋白的翻译后修饰需要相关的酶，但由于是大肠杆菌的异源蛋白，这类酶的缺乏导致中间体大量积累，从而形成包涵体沉淀;
(6)在细菌分泌的某一阶段，蛋白质分子之间的化学相互作用促进了包涵体的形成。
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