蛋白质纯化的原则
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- 发布时间：2022-03-15 10:45
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蛋白质纯化在生化研究和应用中应用广泛，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些是丰富的，而一些只包含几个拷贝。为了研究某种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
蛋白质纯化的原则
蛋白质纯化在生化研究和应用中应用广泛，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些是丰富的，而一些只包含几个拷贝。为了研究某种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
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蛋白质纯化在生化研究和应用中应用广泛，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些是丰富的，而一些只包含几个拷贝。为了研究某种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
蛋白质纯化原则
蛋白质纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白质之间的相似性去除非蛋白质物质的污染，利用蛋白质的差异性从其他蛋白质中纯化出目的蛋白质。每种蛋白质在大小、形状、电荷、疏水性、溶解性和生物活性方面都有差异。利用这些差异，可以从混合物如大肠杆菌裂解物中提取蛋白质以获得重组蛋白质。
蛋白质纯化大致可以分为两个阶段:粗分离阶段和精净化阶段。蛋白质纯化的一般方法是树脂法。在粗分离阶段，目标蛋白质主要与其他细胞成分如DNA和RNA分离。由于此时样品体积大，成分杂，要求使用的树脂容量大，流速高，颗粒大，粒径分布宽，蛋白质能与污染物快速分离。必要时可加入相应的保护剂(如蛋白酶抑制剂)，防止目的蛋白被降解。在精纯化阶段，需要更高的分辨率。在这一阶段，要将目标蛋白与分子量和理化性质相似的蛋白区分开来。应使用较小的树脂颗粒来提高分辨率。通常使用离子交换柱和疏水柱。在应用中，应综合考虑树脂的选择性和柱效。指的是选择性树脂结合目标蛋白的特异性，柱效指的是每种蛋白组分从树脂上逐一洗脱的能力。洗脱峰越窄，柱效越好。只有选择性好，洗脱峰太宽，蛋白质不能有效分离。
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